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內毒素與鱟試劑的反應原理

發布時間: 2022-08-04  點擊次數: 1471次

系海產動物,生物學分類上屬節肢動物門肢口綱劍尾目。在其血液中含有一種特殊的變形細胞amoebocyte。這種變形細胞中含有能被內毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白,因此內毒素檢測LT鱟變形細胞溶解物試驗的機理即是內毒素通過激活C因子、B因子、前凝固酶而使可凝固蛋白變成凝固蛋白肉眼可見的凝膠),從而可以半定量及定量地知內毒素的含量(圖1



日本學者在對可凝固蛋白氨基酸順序研究的基礎上,發現內毒素激活的凝固酶的作用點為可凝固蛋白的第18Arg19Ghr間的肽健以及第46Arg47 G1y間的肽鍵,而裂解為A鏈、B鏈及C肽。且在切斷部位的羧基端氨基酸的結構均為-G1y-Arg提出此酶的作用有特異性2。產色基質內毒素檢測法即是據此原理而設計的。



一般地講,內毒素與試劑的反應是非常特異的因此,LT法的假陽性極少。從革法蘭氏陽性菌分離出的肽聚糖雖亦能凝固鱟試劑,但其活性比內毒素低1000~ 400000倍。


近來發現一種新的合成抗癌劑羧甲基13-β-D-葡聚糖亦能與鱟試劑起反應。其反應原理是:鱟試劑中含有一種稱為G因子的物質,此抗癌劑能激活試劑中的G因子而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白,從而形成凝膠2。至此凝血酶、凝血激酶Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等,亦可凝固鱟試劑而引起假陽反應。但用氯仿處理此等物質(浸取34小時可以除去這些物質從而可避免發生假陽性反應。


哺乳類動物血漿中含一種酯酶,它對內毒素有降解及脫毒的作用,故用LT法檢測血漿中的內毒素易受此種物質的影響,而造成假陰性結果。為了避免此等因素的影響,在試驗前血漿需經過特殊處理。目前共有下述四種方法處理血漿即稀釋加熱法、酸化值液、氯仿浸取法及凝膠過濾法。我們及其它的一些工作者認為稀釋加熱法簡便易行,效果較好。


血液中還有一種稱之為抗LPS因子Anti - LPS - factor,ALF的蛋白物質,分子量約為15KDa,為一種血抗凝劑,LPS介導的LT反應有直接的抑制作用。ALF可抑制LPSLT反應的初始.階段。因此在制備試劑時應將此物質清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ o.o2M可改善試劑的質量,提高敏感性約100倍。

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